在单孔网格上安装串行部分的万无一失的方法

多年来，我们使用大单孔网格进行连续切片，使用一种非常简单的技术，使薄膜厚度、皱纹和切片损失的潜在问题变得非常小。方法如下：

耗材：0.2-1% 的formvar、用于formvar 的薄膜浇铸器或窄容器、用于浇铸薄膜的载玻片、滤纸、镊子、单孔网格、有机玻璃拾取载玻片（新产品）。

1. 购买一套由 Electron Microscopy Sciences 提供的有机玻璃载玻片。
2. 使用标准方法将 formvar 薄膜浇铸到载玻片上。通常，好的银色胶片，而不是灰色胶片，效果会很好。我们以前将载玻片浸入一个含有 0.2% 福尔瓦二氯乙烷溶液的小容器中。我们现在使用带有 1% 福尔马瓦溶液的薄膜连铸机 (EMS #71305-01)，让我们在降低福尔马瓦溶液水平后将载玻片保持在二氯乙烷蒸汽中。这种方法往往会始终为您提供更均匀的薄膜。将载玻片在 formvar 中浸泡 3 分钟，然后在蒸气中浸泡 3 分钟是计时的一个很好的起点。对薄膜连铸机的投资值得多年使用并获得一致的最终产品。
3. 将胶片从载玻片上浮起，然后用有机玻璃拾起滑片将其拾起，使胶片覆盖孔。然后通过将塑料滑片向下压到滤纸上，或使用小块滤纸和毛细管作用将水从各个孔中抽出，将水从孔中抽出。薄膜应该很好地固定在载玻片上的孔上。将幻灯片存放在幻灯片盒中，直到需要为止。
4. 接下来，使用与网格中狭缝直径非常相似的块宽度切割您的部分。该部分的长度可能很窄，导致每个网格有许多部分。
5. 通过轻轻地将网格降低到刀船的表面来拾取未涂层网格上的部分。我们将无光泽的一面朝下，前提是粗糙的表面会在步骤 7 中更好地抓住薄膜。水的表面张力将保持网格开口中的部分。将网格转移到一滴水上，直到完成切片。不要反转网格。网格的顶部（有光泽的一面）保持干燥很重要，这样网格将漂浮在所有后续解决方案上。
6. 将网格 + 切片 + 水滴转移到一滴污渍上。会转移少量水，但这不会干扰染色。如果您担心稀释效果，请稍微增加染色时间。让切片染色，然后通过一系列干净的水滴进行清洗。如果需要，继续后染色并以相同方式洗涤。切勿让网格干燥。如果您使用非常干净的水并通过足够数量的水滴（推荐 6-12 个）转移网格，则污渍沉淀的问题最小。
7. 最后一步是将网格转移到悬挂在有机玻璃拾取载玻片上的孔上的薄膜上，并使其干燥。这些部分现在将粘在薄膜上，没有皱纹且破损最少。准备好查看时，只需用镊子的尖端在网格周围打孔，抓住网格并将其插入显微镜。

相信我......这些部分仍然会在最后！

我们发现，只要这些部分覆盖了网格的大部分开放区域，碳涂层就不是必需的。通过一些练习，可以做 50-100 个网格的连续部分而不会丢失任何部分。这种方法也非常有助于为断层扫描准备切片，没有网格线干扰倾斜和成像。塑料载玻片上的薄膜可以保存数月，因此您可以制作大量薄膜并在需要时存放。